Introducere

În medicină, există încă o întrebare cu privire la eficacitatea tratării patologiilor sistemului de coagulare a sângelui, în special tulburări precum trombocitoza (o creștere patologică a numărului de trombocite) și trombocitopenia (o scădere a numărului de trombocite în sânge) . O capacitate crescută de agregare a trombocitelor se observă într-o serie de boli: boala coronariană, ateroscleroza, angiopatia diabetică etc., ceea ce complică semnificativ evoluția bolii. Prin acțiune farmacologică țintită, este posibilă reducerea hiperagregației trombocitelor care apare patologic sau, dimpotrivă, creșterea capacității lor de agregare.

În această lucrare, a fost investigat efectul derivaților de adamantan cu diferite tipuri de substituenți asupra agregării induse a trombocitelor umane. S-a arătat anterior că amidele acidului N-[(adamantoil-1)-fenil]-antranilic au prezentat o inhibare pronunțată a edemului serotoninic și s-a presupus că acest fenomen a fost cauzat de blocarea receptorilor de serotonină din peretele vascular de către aceste amide.

Noutatea științifică a lucrării: pentru prima dată, au fost studiați derivați de adamantan nou sintetizați care pot îmbunătăți sau reduce efectul inductorilor cunoscuți de agregare a trombocitelor prin modularea funcționării receptorilor trombocitari corespunzători.

Rezultatele lucrării sunt de importanță practică - compușii studiați, după un studiu mai detaliat al mecanismului lor de acțiune, pot fi utilizați ca medicamente.

Scopul lucrării: pentru a studia mecanismele de influență a derivaților de adamantan nou sintetizați asupra agregării induse a trombocitelor umane.

Obiectivele cercetării:

1. Identificați sinergiști (sau agonişti) și antagonişti ai serotoninei dintre compușii studiați;

2. Aflarea mecanismelor de influență a acestor compuși asupra agregării induse a trombocitelor umane;

3. Verificați prezența proprietăților agoniste ale substanțelor de agregare a trombocitelor în toți compușii de testat;

4. Identificați sinergiștii și antagoniștii serotoninei;

5. Identificați sinergiști și antagonişti ai ADP;

6. Identificați sinergiști și antagonişti ai adrenalinei.

Capitolul 1. Revizuirea literaturii

1.1. Mecanisme de agregare a trombocitelor umane

Trombocitele sunt celule sanguine plate, anucleate, de formă rotundă neregulată, formate din megacariocite ale măduvei osoase prin separarea secțiunilor citoplasmei din acestea. Formarea trombocitelor este reglată de hormonul glicoproteic trombopoietină. Trombocitele normale sunt celule cu un diametru de 1-5 microni și o grosime de 0,5-0,75 microni. Conținutul de trombocite în sângele unei persoane sănătoase este de 180-320 mii pe 1 ml. Trombocitele tinere trec printr-o perioadă de maturare de opt zile, trombocitele mature circulă în fluxul sanguin de la cinci la 11 zile, urmate de distrugerea în ficat și splină. Numărul de trombocite din sânge este relativ constant, dar noaptea scade și crește în timpul digestiei, a muncii musculare grele și a sarcinii.

Factorii de coagulare a sângelui sunt adsorbiți pe membrana trombocitară. Trombocitele sunt capabile să elibereze acidul arahidonic din fosfolipidele membranelor lor celulare și să-l transforme în tromboxani (cu participarea tromboxanului sintetazei), care cresc activitatea de agregare a trombocitelor. Regiunea de citoplasmă nestructurată adiacentă membranei trombocitelor este hialomerul. În hialomer, după activarea trombocitelor, la microscopie electronică devin vizibile microfilamente de actină, miozină și tropomiozină, care, împreună cu microtubulii, alcătuiesc citoscheletul celulei, care determină forma și capacitatea acesteia de a mișca organele, se atașează de suprafețe. și formează pseudopodii. Filamentele de actină au un diametru de 3-5 nm, iar filamentele de miozină 6-10 nm. Microfilamentele sunt în contact unele cu altele, membrana plasmatică și membranele granulare. Microtubulii sunt alcătuiți în principal din tubulină, diametrul lor este de 25-30 nm. Un sistem concentric de 5-30 de microtubuli plachetari formează un fascicul periferic sub membrana plasmatică de-a lungul ecuatorului celulei. Sunt prezente și alte structuri nonmembranare, granule de glicogen.

Există două sisteme membranare în trombocite: sistemul tubular dens (TTS) și sistemul cu canale deschise. PTS este un sistem de tuburi înguste cu un diametru de 50 nm, similar cu ER al mușchiului scheletic. Aceste tuburi nu intră în contact cu sistemul de canale deschise, organele și membrana plasmatică ele sunt situate atât de-a lungul ecuatorului celulei, cât și printre organele. Un sistem de canale deschise comunică cu granulele trombocitelor și membrana plasmatică, datorită cărora trombocitele secretă compuși specifici în timpul reacției de eliberare. Suprafața trombocitelor poate crește datorită unui sistem de canale deschise. Partea centrală a trombocitelor (granulomer) conține organele și multe granule de diferite structuri, forme și dimensiuni (granule „dense de electroni”, granule α, lizozomi). Granulele dense de electroni conțin ADP, ATP, GTP, GDP, fosfat anorganic, serotonină, Ca 2+; în α-granule - factor de creștere transformant, β-tromboglobulină, antiheparină (factor lamina 4), fibronectină, albumină, fibrinogen, proaccelerina (factor V), antigen factor von Willebrand (factor VIII), kalicreină, α 2 -antiplasmină, trombospondină, histamina; în lizozomi - hidrolaze acide (β-hexosaminidază, β-galactozidază, β-glucuronidază, β-arabinozidază, β-glicerofosfatază, arilsulfotază). Trombocitele conțin enzime glicolitice și enzime ale ciclului de pentoză fosfat, ciclul acid citricși lanțul respirator, ATPaza.

Cea mai importantă proprietate trombocitele sunt capabile de agregare, timp în care sintetizează și apoi secretă o serie de proteine ​​și substanțe biologic active care stimulează coagularea sângelui (hemostaza). Trombocitele participă, de asemenea, la protejarea organismului de agenții străini. Au activitate fagocitară, conțin IgG și sunt o sursă de lizozim și β-lizine care pot distruge membrana unor bacterii.

Hemostaza are loc în 4 faze: contracția vasului, formarea unui dop de trombocite, formarea unui cheag de sânge roșu și retragerea acestuia, dizolvarea completă sau parțială a cheagului de sânge. Există o cale externă de coagulare (la locul afectarii vasculare, indusă de colagen) și calea interioara coagularea (în zona fluxului sanguin lent pe suprafața alterată patologic a peretelui vascular, indusă de factorii plasmatici), ele diferă în stadiile inițiale, combinându-se în stadiul de activare a factorului X. În prezent, mulți factori de coagulare a sângelui sunt cunoscute, absența oricăruia dintre ele poate duce la întreruperea procesului de coagulare. Sunt în principal enzime proteolitice (factorii XII, XI, X, IX, VII, II și kalikrein - serin proteaze) prezente în sânge sub formă inactivă ca proenzime. În timpul procesului de coagulare, ele se activează reciproc într-o succesiune de reacții în cascadă. Factorii activați sunt desemnați prin adăugarea literei „a”, de exemplu, X a. (Fig. 1)

Orez. 1. Schema coagulării sângelui și fibrinolizei. AF 3 – factor trombocitar 3 (după Zimmerman, 1996)

Imediat după leziune, se observă un spasm primar al vaselor de sânge, din cauza căruia sângerarea poate să nu apară în primele secunde sau poate fi limitată. Spasmul vascular primar este cauzat de eliberarea de adrenalină și norepinefrină în sânge ca răspuns la stimularea dureroasă și durează 10-15 s. Deteriorarea vaselor de sânge este însoțită de activarea imediată a trombocitelor din cauza apariției unor concentrații mari de ADP (din celulele vasculare lezate), precum și de expunerea subendoteliului, colagenului și structurilor fibrilare. Ulterior, apare un spasm secundar din cauza activării trombocitelor și eliberării de agenți vasoconstrictori în sânge - serotonina, tromboxanul A 2, adrenalina etc. (reacție de eliberare).

Lumenul vaselor deteriorate scade și este blocat de o masă de trombocite aderate la fibrele de colagen. Tromboxanul A2 și ADP, eliberați în timpul distrugerii structurii intracelulare a trombocitelor activate, determină atașarea de noi trombocite. ADP poate fi, de asemenea, eliberat din celulele roșii din sânge distruse și promovează transformarea trombocitelor din sânge în discuri și, de asemenea, provoacă secreția de proteine ​​plachetare din granulele dense de electroni și α. Trombocitele răspândite, au până la 10 „procese”, care pot fi de 5-10 ori diametrul celulei în sine. Inelul organizat al microtubulilor se dezintegrează, distribuția microfilamentelor și microtubulilor se modifică, iar microtubulii pot forma glomeruli.

În câteva dintre etapele hemocoagulării, există interacțiuni încrucișate între extern și sisteme interne coagulare, oferind astfel căi „alternative” pentru procesele de coagulare.

Agregarea trombocitelor are loc concomitent cu aderarea lor; acesta este un proces activ care are loc cu consumul de energie. Aderența trombocitelor la fibrele țesutului conjunctiv de la marginile plăgii este cauzată de o glicoproteină oligomerică conținută în subendoteliu și trombocite din sânge - factorul von Willebrand. Formează punți între structurile subendoteliale și receptorii specifici (glicoproteina Ib) de pe membrana trombocitară. Fibrinogenul este o proteină conținută în plasmă și trombocite, care este, de asemenea, capabilă să formeze punți de legătură între trombocite, ceea ce duce la apariția unei rețele de fibrină și a unui dop de trombocite. Proteoliza parțială a moleculei de fibrinogen are loc sub influența trombinei. Pentru formarea legăturilor covalente este necesar factorul XIII de stabilizare a fibrinei (transglutaminaza), activat de trombină în prezența ionilor de calciu. Rețeaua tridimensională de fibre de fibrină ține împreună celulele sanguine și se formează un cheag de sânge roșu (Fig. 1). Datorită trombosteninei proteinei contractile, trombocitele sunt atrase unele spre altele, dopul trombocitar se contractă și se îngroașă, adică are loc retragerea acestuia. Cheagul devine mai dens și strânge marginile rănii, ceea ce facilitează creșterea excesivă a acesteia cu celulele țesutului conjunctiv. În mod normal, oprirea sângerării din vasele mici durează între două și patru minute.

Astfel, atunci când un vas de sânge este deteriorat, în sânge apar substanțe care inițiază procesul de agregare a trombocitelor. Natura acțiunii acestor substanțe este diferită, de exemplu, agenții slabi de agregare sunt ADP, serotonina, adrenalina, vasopresina - aceștia acționează mai întâi, declanșând doar o cascadă de reacții ulterioare. Agregarea are loc mai rapid sub influența colagenului, trombinei și ionoforului A23187. Agregarea trombocitară poate fi reversibilă (în urma agregării vine dezagregarea, dezintegrarea agregatelor), care depinde de o doză insuficientă de agent de agregare sau de prezența în sânge a prostaciclinei PGI 2, sintetizată în endoteliul vascular, care inhibă agregarea trombocitară. Leziunea vasculară este întotdeauna însoțită de formarea simultană a mai multor inductori de agregare, capabili să inițieze agregarea plachetară în moduri diferite, iar concentrația lor este destul de mare, astfel încât dezagregarea, de regulă, nu are loc.

Mecanismele biochimice de activare a trombocitelor cu agregarea lor ulterioară sunt diferite, ceea ce se datorează naturii diferite a inițiatorilor agregării. Cu toate acestea, toate agregatele cunoscute într-un fel sau altul contribuie la creșterea concentrației de Ca 2+ în citoplasma trombocitelor.

Conținutul total de Ca2+ în trombocite este de aproximativ 60 nmol/109 celule. Un sfert din acest calciu este legat de membranele trombocitelor, dar cantități semnificative se găsesc în sistemul tubular și granulele dense. Concentrația ionilor liberi de Ca 2+ în citoplasma trombocitelor (10 -7 mol/l) este de aproape 1000 de ori mai mică decât în ​​plasmă (10 -3 mol/l). Această diferență în concentrația acestor ioni pe ambele părți ale membranei plasmatice este menținută de Ca 2+ -ATPazele membranei, care utilizează energia hidrolizei ATP pentru a pompa Ca 2+ din citoplasmă în organele celulare închise în membrană, precum și adenilat ciclazele și fosfodiesterazele, care controlează nivelul cAMP. Adenilat ciclaza activată catalizează formarea cAMP din ATP, fosfodiesteraza hidrolizează cAMP la 5-AMP. Adenilat ciclaza trombocitară este localizată pe interior membrana plasmatică, pe membranele sistemului tubular dens și sistemul de canale deschise. Fosfodiesteraza este localizată în citoplasmă. Activarea adenilat-ciclazei are loc prin interacțiunea prostaglandinelor E 1, I 2 și D 2 cu receptorii specifici de membrană cuplati cu proteinele care leagă GTP (proteinele G). Pentru acești receptori, cAMP servește ca transmițător intracelular. Receptorii activați acționează asupra proteinelor G, care stimulează adenilat ciclaza, se formează AMPc, iar enzimele dependente de cAMP (protein kinaze) sunt activate, catalizând fosforilarea unui grup mic de proteine ​​plachetare.

Adrenalina, prin legarea de receptori specifici de membrană plachetar, stimulează formarea tromboxanului A2 prin proteinele G. Se presupune că efectul adrenalinei care accelerează agregarea trombocitară este asociat cu modularea membranelor în timpul interacțiunii sale cu receptorii α-adrenergici și o modificare a permeabilității sale la ionii de Ca2+. S-a demonstrat că antagoniştii receptorilor α2-adrenergici sunt capabili să blocheze agregarea, iar agoniştii o intensifică, deoarece proteinele Gi activate inhibă adenilat ciclaza. Prin receptorii β-adrenergici, agregarea trombocitară este încetinită. Stimularea receptorilor β-adrenergici prin proteinele G s duce la activarea adenilat-ciclazei, adică catecolaminele sunt capabile să regleze activitatea trombocitelor, afectând nivelul cAMP din celulă. Adrenalina determină agregarea trombocitelor fără a le schimba forma. O modificare indusă de adrenalină a densității optice a probelor este observată la 30 s după adăugarea acesteia.

Activarea trombocitelor de către trombină, colagen, factor de activare a trombocitelor (PAF) și unele alte agregate are loc prin formarea acidului arahidonic din fosfolipidele membranei plasmatice (fosfatidilcolină și fosfatidilinozitol). Fosfolipaza C, activată prin receptorii cuplați cu proteina G s pentru PAF, catalizează acest proces. Acidul arahidonic poate fi metabolizat, reîncorporat în fosfolipide sau difuzat din trombocite. Eliberarea acidului arahidonic din fosfolipidele plachetare poate fi, de asemenea, catalizată de fosfolipaza A2 și glicerolipază. Acidul arahidonic rezultat poate fi oxidat de două enzime: ciclooxigenază citoplasmatică (COX) și lipoxigenază legată de membrană (LOX). Sub acțiunea COX, se formează endoperoxizi ciclici instabili, care sunt transformați în prostaglandine G 2 și H 2, tromboxan A 2, prostaciclină cu formarea ulterioară a 6-ceto-prostaglandinei E 1, 12-hidroxi-5,8,10. -acid heptadecatrienoic, tromboxan B 2 si malondialdehida. Produșii finali ai căii lipoxigenazei de oxidare a acidului arahidonic sunt acidul 12-hidroxi-5,8,10,14-eicosatetraenoic (12-HETE) și leucotrienele. Prostaglandinele și tromboxanul A2 (ionofor de calciu) formate din acidul arahidonic sunt agregate. Prostaciclina, sintetizată de celulele endoteliale ale vaselor de sânge, dimpotrivă, este un inhibitor puternic al agregării trombocitelor.

Legarea ADP la receptorii specifici de pe membrana plasmatică a trombocitelor duce la o creștere a concentrației ionilor de calciu în citoplasma celulelor (furnizarea acestuia din Mediul extern iar din rezerve intracelulare). În plus, este activată fosfolipaza A2, care stimulează eliberarea acidului arahidonic din fosfolipidele membranei și formarea din acesta a tromboxanului A2, un proagregant și vasoconstrictor activ. Forma trombocitelor se modifică fără activarea concomitentă a fosfolipazei C, care este însoțită de inhibarea adenilat-ciclazei. Implementarea efectelor metabolice ale activării receptorilor ADP plachetari se realizează prin conjugare cu proteina G membranară. Astăzi se știe că, la activare, pe suprafața fiecărei trombocite apar până la 50-100 de mii de receptori pentru glicoproteine. Datele experimentale din multe studii clinice indică faptul că îndepărtarea ADP din mediu sau legarea receptorilor ADP la un antagonist competitiv inhibă în mod semnificativ agregarea trombocitelor.

Există două tipuri de receptori pentru serotonina pe suprafața trombocitelor - canale ionice și receptori cuplati cu proteina G. Conform, mecanismul de acțiune al serotoninei este reglarea căilor dependente de cAMP și, prin urmare, răspunsul la serotonina poate fi blocat de stimulatorii adenilat-ciclazei și inhibitorii fosfodiesterazei. Serotonina stimulează intrarea ionilor de calciu din plasmă în trombocite prin canalele receptorilor pentru cationi divalenți, declanșând ciclul fosfatidilinozitolului cu formarea acidului fosfatidic, care este un ionofor de calciu. Activarea proteinelor G cuplate cu un alt tip de receptor al serotoninei duce la activarea fosfolipazei C, care hidrolizează trifosfatidilinozitol (sau fosfatidil-4,5-bisfosfat) în difosfatidilinozitol (fosfatidilinozitol-4-fosfat) cu formarea de 1,2- diacilglicerol (DAG), care este fosforilat în acid fosfatidic (PA). Acestea sunt primele etape ale activării trombocitelor. Diacilglicerolul stimulează protein kinazele dependente de fosfolipide activate de Ca 2+ (în special, PC C), care fosforilează proteinele. Acidul fosfatidic este un ionofor de calciu care eliberează calciu din rezervele intracelulare prin atașarea acestuia la grupările sale de fosfat. Ionii de calciu stimulează activitatea microfilamentelor de actină și miozină, ca urmare a căreia granulele trombocitelor se deplasează în sistemul de canale deschise, are loc reacția de eliberare a propriilor agregate, ceea ce îmbunătățește răspunsul celulei și activează alte trombocite.

Astfel, activarea trombocitelor începe atunci când agregatele interacționează cu receptorii membranei plasmatice. Rol important Proteinele G ale membranei plasmatice joacă un rol în transmiterea semnalului în trombocite, precum și o modificare a permeabilității membranei la ioni (dacă receptorul este un ionofor).

1.2. Rolul receptorilor membranei plasmatice în procesele de agregare a trombocitelor umane

S-a stabilit acum că punct important semnalizarea transmembranară este o modificare a intensității transportului și a concentrațiilor intracelulare a diferiților ioni. Unul dintre principalele sisteme care duc la modificări ale concentrației intracelulare a ionilor sunt canalele ionice selective ale biomembranelor, care sunt proteine ​​membranare integrale capabile să modifice selectiv permeabilitatea membranei pentru un anumit tip de ion sub anumite influențe externe (modificări ale potențialului). asupra membranei, acțiunea unui mediator sau hormon). Agregarea trombocitară și vasoconstricția sunt induse de 5-hidroxitriptamina (serotonină), care, de asemenea, sporește sinergic efectele tromboxanului A2, angiotensinei II, ADP și colagenului. Această activitate se manifestă prin interacțiunea cu receptorii specifici de pe suprafața trombocitelor - receptorii 5-HT (receptori 5-hidroxitriptamină). Serotonina (5-hidroxitriptamina) este un derivat al triptofanului și este sintetizată în celulele tractului digestiv, nervoase (serotoninergice) și mastocite; capabil să se acumuleze în granule trombocite speciale. Acțiunea fiziologică a serotoninei în corpul uman este variată, este un ligand pentru receptorii celulari în aproape toate organe interneși țesături. Efectele farmacologice ale serotoninei se corelează în primul rând cu stimularea receptorilor 5-HT2. Cercetătorii au sintetizat mulți compuși care se pot lega de acești receptori și pot modula funcționarea acestora. S-a stabilit că receptorii pentru 5-hidroxitriptamina (serotonină) sunt localizați pe celulele aproape tuturor organelor interne umane, reglând multe procese vitale. Clasificarea receptorilor 5-HT în șapte familii (5-HT 1 până la 5-HT 7) se bazează pe criterii structurale, funcționale și farmacologice. Familiile sunt la rândul lor împărțite în subfamilii. S-a descoperit că unii receptori 5-HT sunt cuplati la proteinele G. Receptorii serotoninei localizați pe trombocite și celulele musculare netede vasculare aparțin subtipului de receptor 5-HT 2A restul reprezentanților acestui subtip, 5-HT 2B și 5-HT 2C, sunt localizați numai pe neuroni.

Există date despre locația aproximativă în membrana și structura centrului activ al receptorului 5-HT4.

Reprezentanții unor familii de receptori 5-HT sunt sintetizați folosind metode de inginerie genetică in vitro, izolați prin microdializă sau extracție din membranele celulare. Două tipuri de receptori ai serotoninei sunt localizați pe membrana plasmatică a trombocitelor.

Studiile au arătat dependența scăderii capacității de agregare a trombocitelor de geometria moleculei substanței studiate. Există dovezi că afinitatea pentru receptorii 5-HT2 crește în prezența unui substituent adamantil voluminos. Efectul antagonist al diclorhidratului de SB-699551-A (3-ciclopentil-N--N-[(4¢-([(2-feniletil)amino]metil)-4-bifenilil)metil]propanamidă), care are un volum , structură moleculară complexă pe receptorii 5-HT 5A din creierul de porc.

Receptorii ionotropi ai serotoninei sunt membri ai unei superfamilii de proteine ​​de membrană care include și receptori pentru nicotină, glicină și acid y-aminobutiric (GABA). Toate au aceleași proprietăți - aceeași proteină este atât un receptor, cât și un canal ionic, format din diferite combinații de subunități 2α, β, γ, δ și ε. Ligandul receptor al acestei superfamilii se leagă de subunitatea α și stimulează deschiderea unui canal ionic nespecific.

Majoritatea receptorilor aparțin familiei de glicoproteine ​​monomerice care traversează membrana de șapte ori. Ele îndeplinesc o varietate de funcții de semnalizare biologică. Acești receptori includ adrenoreceptori și receptori ADP plachetari, precum și o parte a receptorilor 5-HT plachetari. ADP activează trombocitele prin cei trei receptori dependenți de adenozină fosfat: P2X, P2I și P2T. Receptorii pentru glicoproteine ​​au foarte origini antice. Sunt folosite, de exemplu, de celulele de drojdie, care secretă factorii polipeptidici necesari împerecherii și îi recunosc cu ajutorul receptorilor de suprafață, care sunt aceiași receptori care traversează membrana de șapte ori.

Structura unică a regiunilor de legare a ligandului ale receptorilor care traversează membrana de șapte ori permite legarea liganzilor de diferite naturi și greutăți moleculare într-un interval larg de la 32 pentru Ca2+ la mai mult de 102 kDa pentru glicoproteine.

Cei mai obișnuiți hormoni cu greutate moleculară mică (cum ar fi adrenalina și acetilcolina) se leagă de locurile din miezul hidrofob (a). Liganzii peptidici și proteici se atașează la suprafața exterioară a receptorului (b, c). Unii liganzi cu greutate moleculară mică, Ca 2+ și aminoacizi (glutamat, GABA) se leagă de secțiunile lungi la capătul N-terminal, inducând tranziția lor la o nouă conformație în care secțiunea lungă interacționează cu receptorul (d). În cazul receptorilor activați prin tăierea proteazei (e), noul capăt N-terminal acționează ca un autoligand. Peptida tăiată poate interacționa, de asemenea, cu un alt receptor.

1.3. Activitatea biologică a derivaților adamantanului

Derivații de adamantan ca substanțe active din punct de vedere fiziologic au fost utilizați pe scară largă încă din anii 70 ai secolului XX. Adamantanul însuși (triciclodecan, C 10 H 16) aparține naftenelor triciclice de tip punte (Fig. 6).

Orez. 6. Structura moleculei de adamantan.

Molecula sa constă din trei inele de ciclohexan topite într-o conformație de scaun. Modelul spațial al moleculei de adamantan este o structură foarte simetrică, cu o suprafață mică și forțe nesemnificative de interacțiune intermoleculară în rețea cristalină. Dintre toate hidrocarburile triciclice, adamantanul este cea mai stabilă, ceea ce se explică prin orientarea tetraedrică a legăturilor tuturor atomilor de carbon și poziția lor fixă.

Activitatea biologică a derivaților adamantanului se datorează simetriei și volumetricității structurii spațiale, semnificative
lipofilitatea cadrului rigid de hidrocarburi al adamantanului, care le permite să pătrundă cu ușurință în membranele biologice. Prin urmare modificare compusi organici cu ajutorul radicalului adamantil, le modifică semnificativ activitatea biologică, deseori intensificând-o. Folosind metoda etichetei spin, s-a demonstrat că adamantanul, care pătrunde în stratul dublu lipidic, este capabil să distrugă împachetarea hexagonală a grupărilor metilen caracteristice stratului dublu de fosfolipide și să perturbe aranjamentul axial al lanțurilor alchilice ale fosfolipidelor, modificând astfel proprietățile funcționale. a membranelor celulare. Ținând cont de importanța ordinii de aranjare a grupelor metilen de lipide ale membranelor biologice ca factor în funcționarea enzimelor asociate membranei, se poate observa un efect indirect al adamantanului asupra activității lor.

Pe acest moment Au fost sintetizați peste 1000 de noi derivați de adamantan. Studiul farmacologic a evidențiat prezența printre aceștia a unor substanțe cu activități pronunțate psihotrope, imunotrope, antivirale, curare, anticataleptice, antialergice, precum și compuși care afectează sistemul enzimatic al ficatului. Amidele acidului adamantancarboxilic prezintă activitate antibacteriană.

Există date despre rezultatele modificării moleculei de encefalină cu aminoacizi din seria adamantanului. (S)-adamantylanina introdusă în poziția 5 a moleculei de encefalină conferă peptidei opioide rezistență la enzimele care distrug cu ușurință encefalina nemodificată (chimotripsină, pronază, protează neutră, termolizină).

S-a demonstrat că derivații care conțin azot au activitate fiziologică. Primul care a intrat în practica medicală în 1966 a fost clorhidratul de 1-aminoadamantan, care are activitate antivirală împotriva tulpinilor de virusuri de tip A 2 denumirile sale de marcă: midantan, symmetrel, amantadină. Aceste medicamente sunt folosite pentru prevenirea bolilor respiratorii, deoarece au capacitatea de a bloca pătrunderea virusului în celulă. Se crede că aceste medicamente pot funcționa etapele inițiale reproducerea virusului prin blocarea sintezei ARN-ului specific virusului. Activitatea antivirală a unor derivați amino ai adamantanului este asociată cu capacitatea lor de a inhiba PKC. Remantadina (polirem, flumadina), ca bază slabă lipofilă, este capabilă să crească pH-ul conținutului endozomal și să prevină deproteinizarea virusului.

În practica clinică pentru tratament boli virale De asemenea, sunt utilizate medicamente precum aciclovir (virolex, herpesin, zovirax, lizavir, supraviran), didanozină, foscarnet (triapten), ganciclovir (cymevene), lamivudină, ribavirina (virazol, ribamidil), stavudină, trifluridină, vidarabină, zalcitabină (hivid). , zidovudină (azidotimidină, retrovir). Cu toate acestea, majoritatea acestor medicamente au un spectru relativ îngust de acțiune antivirală dezavantajul lor este prezența diferitelor reacții adverse, apariția unor tulpini rezistente de virusuri etc.

Derivații de alchiladamantan au, de asemenea, activitate antivirală împotriva tulpinilor de virus de tip A 2: 1-hidroxi-3,5dimetil-7-etiladamantan, 1-metoxi-3,5dimetiladamantan, care, spre deosebire de midantan, a prezentat activitate antivirală ridicată împotriva tulpinilor de virusuri și herpessimplex. Un număr de hidroxi-, halogen- și mercapto-derivați ai adamantan-amidelor au, de asemenea, activitate antivirală.

S-a demonstrat că amantadina este capabilă să prevină dezvoltarea focarelor de sarcom în culturile embrionare alți derivați de adamantan pot servi ca hipnotice, medicamente antimalarice și insecticide. Experimentele folosind celule limfoblastoide umane infectate cu HIV au arătat că unii derivați de adamantan au activitate anti-HIV. Midantan este utilizat în clinica neurologică pentru tratamentul bolii Parkinson și sindromului parkinsonian. Activitate similară este prezentată de clorurile acide ale 1-aminoadamantanilor substituiți cu 3,5,7-alchil, dintre care unii au proprietăți antagoniste ale dopaminei. Unele baze de amoniu cuaternar cu un radical 2-adamantil pot acționa ca relaxanți musculari cu acțiune periferică (activitate asemănătoare curare). Derivații de 1-aminoadamantan și 3,3-diamino-1,1-diadamantil sunt acizii adamantancarboxilici și fosfații adamantan-carboxilici și derivații lor au efect bacteriostatic. Esterii dialchilamină ai acidului adamantiocarboxilic prezintă activitate bactericidă, fungicidă și erbicidă. Sarea de sodiu a acidului β-(1-adamantan)-propionic are un efect coleretic. 1-adamantilamoniu-β-cloretiloxaminoat și alți derivați de adamantan de tip 1-AdCH2OCH2CH(OH)CH2NRR΄ au efect anestezic.

Un efect antibacterian comparabil cu medicamentul antibacterian 5-nitro-8-hidroxichinolina este exercitat de N-(nitrofenil)-adamantil-carboxamidele și iodurile de N-(1-metilpiridiniu) substituite cu adamantil.

Adamantanul perfluorinat este utilizat ca componentă a sângelui artificial. Există dovezi ale capacității de antiagregare a derivaților de adamantan în relație cu diferite căi de agregare a trombocitelor.

1.4. Derivații de adamantan care afectează agregarea trombocitară

Natura lipofilă pronunțată a fragmentului de carbon cadru al adamantanului determină activitatea biologică ridicată a derivaților săi. Introducerea unui radical puternic lipofil în molecula derivată sporește interacțiunea acestuia cu regiunile hidrofobe ale moleculelor receptorului.

S-a demonstrat efectul fragmentelor modificate de adamantil și amidă ale amidelor acidului N-[(adamantoil-1)-fenil]-antranilic asupra receptorilor 5-HT2 ai trombocitelor umane: o scădere a agregării lor induse de ADP și serotonină. În plus, se știe că afinitatea pentru acești receptori se datorează prezenței unui substituent adamantil voluminos. S-a presupus activitate biologică un număr de 1-adamantan carboxamide ca antagonişti ai receptorilor plachetari 5-HT2. Afinitatea foarte specifică pentru receptorii studiați și un efect anti-agregare puternic au fost confirmate atât in vitro, cât și in vivo pentru clorhidratul de (S)-N-(1-pirolidin-3-il)-1-adamantancarboxamidă hidrat (10-(S) , Y-39241).

O serie de derivați de adamantil sintetizați ai compușilor heterofuncționali au prezentat proprietăți ca antagoniști și sinergiști ai serotoninei atunci când au studiat efectul lor asupra agregării trombocitelor umane indusă de serotonină.

Capitolul 2. Material şi metode de cercetare

A fost efectuat un studiu al efectului a 19 derivați de adamantan cu substituenți care diferă ca structură și proprietăți asupra agregării induse a trombocitelor umane (Tabelul 1).

Tabelul 1.

Compuși în studiu

№	Formula chimică a substanței	Numele substanței
1		Clorhidrat de N-(1-adamantil)-3-aminopiridină
2		iodură de 2-1-metilpiridiniu
3		iodură de 4-1-metilpiridiniu
4		iodură de N-(1-metilpiridiniu-3-il)-adamantil-1-carboxamidă
5		iodură de 2--4-brom-1-metilpiridiniu
6		3-(adamantil-1-carboniloxi)-2-etil-6-metilpiridină
7		2-(adamantil-1-carboniloxi)-piridină

Continuarea tabelului 1.

№	Formula chimică a substanței	Numele substanței
8		N-(1-adamantilacetil)-2-aminopiridină
9		N-(1-adamantilacetil)-4-aminopiridină
10		N-(1-adamantilacetil)-3-aminopiridină
11		N-(1-adamantoil)-D,L-triptofan
12		3-(1-adamantancarboxamido-etil)indol
13		N-(1-adamantoil)-D,L-histidină
14		benzoat de 4-adamantancarboxamido-etil
15		4-adamantancarboxamido-N - -benzoat
16		4-adamantancarboxamido-N-benzamidă

Continuarea tabelului 1.

Aceste substanțe au fost sintetizate în laboratorul catedrei Chimie organica Candidat coleg de cercetare SamSU la științe chimice Ermokhin V. A. Structura compușilor nou sintetizați a fost dovedită prin date de spectroscopie 1H RMN și IR (Anexă, Tabelele 1-4). Spectrele IR ale compuşilor au fost înregistrate pe un spectrofotometru IKS-29 în tablete KBr. Spectrele RMN au fost obţinute pe un instrument BrukerWP-200 SY (frecvenţă de operare 200,13 MHz). S-au folosit ca solvenți DMSO-d6, CD3CN, CDCI3. Deplasările chimice au fost măsurate în raport cu semnalul TMS. Pentru a confirma identitatea tuturor compușilor obținuți, s-a efectuat cromatografia în strat subțire pe plăci SilufolUV în acetat de etil. Compușii nr. 18 și nr. 19 au fost sintetizați anterior.

Agregarea trombocitelor a fost studiată folosind metoda fotometrică Born. Principiul metodei se bazează pe înregistrarea unei scăderi a densității optice a plasmei de testat după introducerea în ea a unui agent de agregare a trombocitelor. Trombocitele se „lipesc”, agregatele rezultate se stabilesc treptat, iar proba de plasmă devine mai transparentă.

Materialul biologic a fost furnizat de stația regională de transfuzie de sânge Samara. Sângele prelevat din vena antecubitală a fost stabilizat cu soluție de citrat de sodiu 3,8% (9:1). Plasma bogată în trombocite a fost obţinută prin centrifugare sânge citrat la 1000 rpm timp de 10 minute. Plasma a fost diluată cu o soluție de clorură de sodiu 0,154 M, pH 7,2, până când densitatea optică a probei a ajuns la 0,4-0,6 unități. (standardizare cu plasmă). Plasma a fost turnată în cuve de 2 ml. Compușii studiați au fost dizolvați în alcool etilic 96%. Dizolvat în soluție salină 0,154 M a fost utilizat ca agenți de agregare. soluție pH 7,2 sulfat de creatină 5-hidroxitriptamină (serotonină) și ADP la o concentrație finală de 1 x 10 -5 M. În experiment a fost utilizată și clorhidrat de adrenalină la o concentrație de 0,1% ca agregat. Concentrațiile finale ale tuturor compușilor au fost 0,099 mg/ml. Densitatea optică a fost măsurată față de controlul pe SF-46 la o lungime de undă de 600 nm, cuvă de 10 mm (s-a adăugat alcool la proba de control în loc de o soluție de substanță) timp de 30 de minute. Intensitatea agregării a fost judecată după modificarea densității optice în raport cu controlul, care a fost exprimată în unități arbitrare: ∆ A 30 (modificarea densității optice în 30 de minute)´1000 = x y. e.

Datele obținute au fost analizate pentru a stabili valorile lor de semnificație conform testului t Student. Datele au fost considerate fiabile la nivelul de semnificație p<0,05 .

Capitolul 3. Rezultate și discuții

Activitatea biologică a oricărui compus chimic este determinată de structura sa și de conformația moleculei sale. În acest experiment, am identificat mai întâi câțiva derivați de adamantan care afectează agregarea trombocitelor umane indusă de serotonină in vitro. Au fost apoi investigate mecanismele de influență a acestor compuși asupra agregării trombocitelor umane.

3.1. Efectul derivaților de adamantan asupra agregării trombocitelor umane indusă de serotonină în vitro

Derivați de hidroxi și aminopiridine și ioduri care conțin adantil N -adamantoil-1-metilpiridiniu și O-adamantoil- N -metilpiridiniu.În probele cu adăugare de derivat de adamantan nr. 1, agregarea trombocitelor este mai puțin intensă în comparație cu agregarea din probele martor, dar această diferență nu este semnificativă (Tabelul 2).

Masa 2.

Efectul clorhidratului de N-(1-adamantil)-3-aminopiridină asupra agregării plachetare umane indusă de serotonină in vitro

Compusul nr. 2 diferă de compusul nr. 1 prin poziția azotului aminopiridină și prezența unei grupări metil pe acest atom de azot, sarcina azotului piridinic din compusul nr. 2 este protejată de un ion de iodură, iar în compus; Nr. 1 – printr-un ion clor (Tabelul 1). În ciuda unor astfel de diferențe structurale minore, compusul nr. 2 s-a dovedit a fi un sinergist al serotoninei în procesul de agregare a trombocitelor (Tabelul 3).

Tabelul 3.

Efectul iodurii de 2--1-metilpiridiniu asupra agregării trombocitelor umane indusă de serotonină in vitro

<0,001 к контролю.

Din datele obținute, s-a concluzionat că capacitatea compușilor studiați de a influența agregarea plachetară indusă de serotonină se corelează cu poziția azotului piridinic în raport cu oxigenul grupării adamantoil. Este probabil ca azotul piridinic din a doua poziție să confere derivatului adamantan proprietățile unui sinergist al serotoninei. Pentru a testa această ipoteză, a fost efectuat un experiment cu o substanță al cărei azot piridinic se află în poziția a patra (Tabelul 4).

Tabelul 4.

Efectul iodurii de 4--1-metilpiridiniu asupra agregării trombocitelor umane indusă de serotonină in vitro

Ipoteza a fost confirmată: în probele cu iodură de 4--1-metilpiridiniu, intensitatea agregării s-a dovedit a fi aproape aceeași ca în probele martor. Derivatul nr. 3 nu afectează agregarea plachetară indusă de serotonină, deși diferă de derivatul nr. 2 doar în poziția azotului metilat. Pentru a testa dacă capacitatea compusului nr. 2 de a influența agregarea plachetară indusă de serotonină depinde de prezența unei grupări amino în grupa adamantoil, a fost efectuat un experiment cu o substanță cu o grupare carboxil (Tabelul 5).

Tabelul 5.

Efectul iodurii de N-(1-metilpiridiniu-3-il)-adamantil-1-carboxamidă asupra agregării trombocitelor umane indusă de serotonină in vitro

Notă: nivelul de fiabilitate al rezultatelor ***- p<0,001 к контролю.

Rezultatele experimentului cu substanța nr. 4 sunt aproape aceleași ca și cu substanța nr. 2, ceea ce demonstrează încă o dată dependența activității biologice a derivaților de adamantan de poziția azotului piridinic în raport cu oxigenul grupării adamantoil. .

Modificarea grupării adamantoil prin metilare și introducerea unui derivat de ion bromură în moleculă a redus semnificativ capacitatea compusului rezultat de a influența agregarea trombocitelor umane indusă de serotonină (Tabelul 6).

Tabelul 6.

Efectul iodurii de 2-4-bromo-1-metilpiridiniu asupra agregării trombocitelor umane indusă de serotonină in vitro

De asemenea, „nereușită” a fost modificarea compusului, care a dus la un derivat mai hidrofob nr. 6. 3-(adamantil-1-carboniloxi)-2-etil-6-metilpiridină (compusul nr. 6), spre deosebire de substanțele anterioare , nu are o sarcină intramoleculară și nu a prezentat aproape nicio activitate biologică împotriva agregării trombocitelor (Tabelul 7).

Tabelul 7.

Efectul 3-(adamantil-1-carboniloxi)-2-etil-6-metilpiridinei asupra agregării trombocitelor umane indusă de serotonină in vitro

Molecula de 2-(adamantil-1-carboniloxi)-piridină este, de asemenea, foarte hidrofobă și, de asemenea, nu a avut aproape niciun efect asupra agregării trombocitelor induse de serotonină (Tabelul 8).

Tabelul 8.

Efectul 2-(adamantil-1-carboniloxi)-piridinei asupra agregării plachetare umane indusă de serotonină in vitro

Și N-(1-adamantilacetil)-2-aminopiridina nu are aproape niciun efect asupra agregării plachetare indusă de serotonină, deși azotul piridinic se află în a doua poziția (Tabelul 9).

Tabelul 9.

Efectul N-(1-adamantilacetil)-2-aminopiridinei asupra agregării plachetare umane indusă de serotonină in vitro

Aceasta înseamnă că, dacă azotul piridinic din molecula derivată de adamantan se află în poziţia a doua, manifestarea activităţii sale biologice necesită polaritatea moleculei, care favorizează hidratarea acesteia.

În mod interesant, N-(1-adamantilacetil)-4-aminopiridina s-a dovedit a fi un sinergist al serotoninei (Tabelul 10).

Tabelul 10.

Efectul N-(1-adamantilacetil)-4-aminopiridinanei asupra agregării plachetare umane indusă de serotonină in vitro

Notă: nivelul de fiabilitate al rezultatelor este ٭- p<0,05 к контролю.

Un derivat similar de aminopiridină al adamantanului cu un azot piridinic în poziţia a treia nu afectează agregarea plachetară a serotoninei (Tabelul 11).

Tabelul 11.

Efectul N-(1-adamantilacetil)-3-aminopiridinei asupra agregării plachetare umane indusă de serotonină in vitro

Dintre toate adamantil-aminopiridinele hidrofobe, compusul al cărui azot piridinic se află în poziţia a patra are proprietăţi sinergice cu serotonina (Tabelul 10). Dintre derivații de adamantil (adamantoil) piridină mai hidrofili, derivații de aminopiridină, al căror azot piridinic se află în a doua poziția, s-au dovedit a fi sinergiști ai serotoninei (Tabelele 3, 5). Rețineți că acești compuși au o sarcină intramoleculară, ceea ce facilitează solubilitatea lor în mediul intercelular apos, menținând în același timp membranotropicitatea.

N -adamantoil-α-aminoacizi. Amestecul racemic de derivat de triptofan adamantan a arătat o tendință slabă de a încetini agregarea plachetară indusă de serotonină (Tabelul 12).

Tabelul 12.

Efectul N-(1-adamantoil)-D,L-triptofanan asupra agregării plachetare umane indusă de serotonină in vitro

Un derivat de triptamină este capabil să accelereze agregarea plachetară indusă de serotonină, iar un amestec de derivați de D- și L-histidină, dimpotrivă, o încetinește semnificativ (Tabelele 13, 14).

Tabelul 13.

Efectul 3-(1-adamantancarboxamido-etil)indlanului asupra agregării plachetare umane indusă de serotonină in vitro

Notă: nivelul de fiabilitate al rezultatelor este ٭٭٭- p<0,001 к контролю.

Tabelul 14.

Efectul N-(1-adamantoil)-D,L-histidinane asupra agregării plachetare umane indusă de serotonină in vitro

Notă: nivelul de fiabilitate al rezultatelor este ٭٭٭- p<0,001 к контролю.

Din datele experimentale este clar că amestecurile de derivați de D- și L-aminoacizi ai adamantanului prezintă proprietăți antagoniste ale serotoninei în procesul de agregare a trombocitelor, iar derivatul de triptamină prezintă proprietăți sinergice. Capacitatea derivatului de triptamină (3-(1-adamantancarboxamido-etil)indol) de a spori agregarea plachetară indusă de serotonină se datorează cel mai probabil asemănării sale structurale cu serotonina însăși (Fig. 7).

Orez. 7. Structura serotoninei (a) și 3-(1-adamantancarboxamido-etil)indol (b). Este vizibilă asemănarea în structura serotoninei (5-hidroxitriptamina) și a derivatului activ biologic al adamantanului.

Derivați ai acidului 4-aminobenzoic care conțin adantil. Primul dintre derivații de acid 4-aminobenzoic care a fost studiat a fost benzoatul de 4-adamantancarboxamido-etil, care a arătat o tendință de a reduce intensitatea agregării plachetare indusă de serotonină (Tabelul 15).

Tabelul 15.

Efectul benzoatului de 4-adamantancarboxamido-etil asupra agregării trombocitelor umane indusă de serotonină in vitro

Modificarea benzoatului de 4-adamantancarboxamido-etil, rezultând 4-adamantancarboxamido-N - -benzoat, a dus la apariția proprietăților sinergice ale serotoninei în noul compus (Tabelul 16).

Tabelul 16.

- -benzoat pe agregarea plachetară umană indusă de serotonină in vitro

Notă: nivelul de fiabilitate al rezultatelor este ٭٭٭- p<0,001 к контролю.

Modificarea benzoatului la benzamidă duce la o modificare a activității biologice a derivatului până la o tendință de a încetini agregarea trombocitară indusă de serotonină în probele experimentale în comparație cu martor (Tabelul 17).

Tabelul 17.

Efectul 4-adamantancarboxamido-N - -benzamidă asupra agregării plachetare umane indusă de serotonină in vitro

Când benzamida este clorurată și hidroximetilată, se obține un derivat de adamantan care are proprietățile unui sinergist al serotoninei (Tabelul 18).

Tabelul 18.

Efectul 4-adamantancarboxamido-5-cloro-N--2-metoxibenzamidei asupra agregării plachetare umane indusă de serotonină in vitro

Notă: nivelul de fiabilitate al rezultatelor este ٭-р<0,05 к контролю.

Derivați de etilendiamină care conțin adantil.Încă doi derivați de adamantan, care teoretic ar trebui să influențeze agregarea plachetară indusă de serotonină, nu au arătat activitatea biologică așteptată în experiment. În probele experimentale cu adaos de clorhidrat de N-(1-adamantoil)etilendiamină, intensitatea agregării trombocitelor este aproape aceeași ca în probele martor (Tabelul 19).

Tabelul 19.

Efectul clorhidratului de N-(1-adamantoil)etilendiamină asupra agregării trombocitelor umane indusă de serotonină in vitro

Derivatul de adamantan nr. 19, a cărui moleculă este simetrică și include două grupări adamantoil, a arătat doar o tendință de a reduce intensitatea agregării trombocitelor induse de serotonină (Tabelul 20).

Tabelul 20.

Efectul N,N"-di-(1-adamantoil)etilendiaminei asupra agregării plachetare umane indusă de serotonină in vitro

Există două tipuri de receptori pentru serotonina pe membrana trombocitară - canale ionice și receptori cuplati cu proteina G. Prin urmare, serotonina este capabilă să induce procese de agregare a trombocitelor în două moduri, fiind un ligand pentru două tipuri diferite de receptori. Funcționarea căror tip de receptori ai serotoninei este afectată de compușii adăugați la probele experimentale poate fi verificată prin experimente similare, unde agregatul este un ligand cunoscut pentru receptorii cuplati cu proteinele G, de exemplu, ADP și adrenalină. Pentru aceste experimente au fost selectați 5 compuși: compușii nr. 2, 12, 9, care au prezentat cel mai pronunțat efect sinergetic al serotoninei (compușii nr. 15 și 17 nu au mai fost studiați, deoarece s-au dovedit a fi instabili); compusul nr. 13, care a prezentat proprietățile unui antagonist al serotoninei și nr. 14, care, deși foarte slab, încetinește și agregarea trombocitelor indusă de serotonină.

Activitatea substanței nr. 4 nu a fost aproape deloc diferită de cea a substanței nr. 2, structura lor diferă de asemenea puțin (Tabelele 3, 5), prin urmare, pentru a nu complica experimentul, substanța nr. 4 nu a fost studiată.

Efectul compușilor studiați asupra agregării trombocitelor induse de serotonină este mai clar vizibil în graficele dependenței densității optice a probelor în timp.

Scăderea densității optice în probele experimentale cu adăugarea substanței nr. 2 are loc mai intens decât în ​​probele martor, ceea ce indică capacitatea acestui compus de a îmbunătăți agregarea trombocitelor. În probele experimentale cu adaos de substanță nr. 9, densitatea optică scade și ea mai intens decât la probele martor, deși aici diferența dintre experiment și control este mai netezită. Substanța nr. 12 îmbunătățește, de asemenea, agregarea plachetară indusă de serotonină. Efectul substanței nr. 13 asupra agregării trombocitelor încetinește scăderea densității optice a probelor experimentale. Substanța nr. 14 este, de asemenea, capabilă să încetinească agregarea plachetară indusă de serotonină, dar mai puțin intens decât substanța nr. 13.

3.2. Mecanisme de influență a derivaților adamantanului asupra agregării plachetare umane inductibile în vitro

Până în prezent, în literatura de specialitate nu există informații despre posibilele mecanisme de influență a unor astfel de compuși asupra funcționării receptorilor plachetari. Efectul substanțelor asupra ratei de agregare a trombocitelor se poate datora capacității lor de a spori afinitatea serotoninei pentru receptori (sinergiști) sau de a bloca într-un fel accesul ligandului la receptorul său. De asemenea, este posibil să existe un efect agonist asupra receptorului cu o mică constantă de asociere a agonistului cu molecula receptoră. Pentru a testa aceste ipoteze, au fost efectuate experimente cu substanțe fără a induce agregarea de către agreganți cunoscuți. Studiile au arătat că substanțele nu sunt capabile să inducă în mod independent agregarea (Tabelul 21, Fig. 10).

Tabelul 21.

Efectul derivaților de adamantan asupra agregării plachetare umane neinduse in vitro

Orez. 10. Dinamica scăderii densității optice a probelor în timpul agregării neinductibile a trombocitelor umane: ( AbVGd) Compusul nr. 14 a fost adăugat la probele experimentale. Intensitatea agregării în probele experimentale nu este aproape deloc diferită de cea din probele de control.

Datele obținute indică faptul că derivații studiați nu sunt capabili să conducă independent semnalul, ci doar afectează afinitatea serotoninei pentru receptorul plachetar, modulând eficiența semnalului de activare (Fig. 8).

Din rezultatele experimentelor cu adăugarea de substanțe în timpul inducerii agregării plachetare de către ADP, prezentate în Tabelul 22, este clar că 4-adamantan carboxamido-etil benzoat (compusul nr. 14) este capabil să încetinească semnificativ ADP-ul indus. agregarea trombocitelor. Poate că această abilitate provoacă o ușoară încetinire a agregării induse de serotonină.

Tabelul 22.

Efectul derivaților de adamantan asupra agregării plachetare umane indusă de ADP in vitro

<0,05; ٭٭- p<0,01 к контролю.

Evident, derivatul nr. 14 afectează receptorii trombocitelor cuplati cu proteinele G, blocând semnalul de activare a agregării. Și N-(1-adamantilacetil)-4-aminopiridina (derivatul nr. 9), dimpotrivă, accelerează intens transmisia semnalului și îmbunătățește agregarea plachetară indusă de ADP. Iodura de 2--1-metilpiridiniu (derivatul nr. 2) îmbunătățește aici, de asemenea, agregarea, dar nu atât de intens. Substanța nr. 13 nu afectează agregarea plachetară indusă de ADP. Rezultatul acțiunii derivatului de indol (nr. 12) este oarecum neclar de eroarea mare a valorii medii din cauza fluctuațiilor individuale ale parametrilor plasmatici ai diferitelor persoane. Dar accelerarea agregării trombocitelor în probele cu substanța nr. 12 în comparație cu martor este semnificativă (Tabelul 22).

Rezultatele experimentelor cu adăugarea de substanțe pentru a induce agregarea trombocitelor prin ADP sunt prezentate în Figura 11.

Orez. 11. Dinamica scăderii densității optice a probelor în timpul agregării trombocitelor umane indusă de ADP. ( A) Compusul nr. 2 a fost adăugat la probele experimentale (. b) Compusul nr. 9 a fost adăugat la probele experimentale (. V) Compusul nr. 12 a fost adăugat la probele experimentale (. G) Compusul nr. 13 a fost adăugat la probele experimentale (. d) Compusul nr. 14 a fost adăugat la probele experimentale.

Rețineți că efectul compușilor studiați asupra agregării trombocitelor induse de ADP nu se observă imediat după adăugarea lor la probe (ca în experimentul cu serotonină), ci numai după o anumită perioadă. latent perioada (Fig. 11). Aceasta înseamnă că compușii încep să afecteze receptorii ADP numai după introducerea în membrana plasmatică, schimbându-și afinitatea pentru ligand.

Scăderea densității optice în probele experimentale cu compusul nr. 2 în primele 20 de minute diferă puțin de cea din probele de control, dar în următoarele 10 minute este mai intensă și semnificativ diferită de martor. După cinci minute de expunere, scăderea densității optice în probe cu adăugarea substanței nr. 9 este mai intensă. Diferențele de dinamică a scăderii densității optice a probelor experimentale și de control din experimentul cu substanța nr. 12 încep de asemenea după cinci minute de expunere. Intensitatea scăderii densității optice în probele experimentale din experimentul cu substanța nr. 13 nu este aproape deloc diferită de cea din probele de control. Compusul nr. 14 ajută la încetinirea scăderii densității optice a probelor experimentale după 10 minute de la începutul agregării (Fig. 11).

Datele obținute indică faptul că, cel mai probabil, derivații nr. 2 și 13 modifică afinitatea serotoninei pentru receptorii canalelor ionice, iar derivații nr. 9, 12 și 14 sunt capabili să influențeze afinitatea ligandului pentru receptorii săi pentru glicoproteine ​​(Tabelul 22). ).

Receptorii pentru glicoproteine, care funcționează prin proteinele G, includ majoritatea receptorilor celulari (în acest caz, trombocitele). Se pune întrebarea despre specificul influenței derivaților adamantani studiati. Este posibil ca printre acești compuși să existe sinergiști ai altor agregate care transmit și un semnal de activare prin asociere cu receptorii glicoproteici. Într-adevăr, ipoteza a fost confirmată de un experiment cu adăugarea de substanțe în timpul inducerii agregării plachetare de către adrenalină: substanțele nr. 9 și nr. 12 accelerează transmiterea semnalului prin receptorii adrenergici cuplati cu proteina G, iar substanțele nr. 2, 13 și 14 nu sunt capabili să moduleze funcționarea receptorilor adrenergici plachetari (Tabelul 23, Fig. 12).

Tabelul 23.

Efectul derivaților de adamantan asupra agregării plachetare umane indusă de adrenalină in vitro

Notă: nivelurile de încredere ale rezultatelor ٭-р<0,05; ٭٭٭- p<0,001 к контролю.

Dinamica scăderii densității optice în probe cu adăugarea compusului nr. 2 nu diferă de cea din control (la fel ca și în experimentul cu compușii nr. 13 și nr. 14). Aceasta înseamnă că acești compuși nu sunt capabili să influențeze transmiterea semnalului de activare prin receptorii adrenergici. Adăugarea compusului nr. 9 la probele experimentale a accelerat semnificativ scăderea densității optice a acestora în comparație cu martor, același lucru s-a observat și cu adăugarea compusului nr.

Este destul de evident că sub influența compușilor nr. 9 și 12, eficiența acelei etape (sau a mai multor etape) de funcționare a receptorilor de glicoproteină, care este comună tuturor tipurilor de acești receptori, crește, indiferent de specificitatea lor ( Fig. 12, b, c).

Astfel, activitatea biologică a derivaților de aminopiridină ai adamantanului, dovedită de studiile anterioare, este confirmată în experimentul nostru: N-(1-adamantilacetil)-4-aminopiridina (Nr. 9) crește semnificativ afinitatea receptorilor plachetari pentru toate agregatele utilizate în experimentul (Tabelele 10, 22, 23). Mai mult, acest lucru indică cel mai probabil capacitatea sa de a modula funcționarea receptorilor pentru glicoproteine. Modificarea substituentului aminopiridină în derivatul adamantan duce la modificarea activității acestuia: iodura de 2--1-metilpiridiniu (nr. 2) crește aparent afinitatea serotoninei pentru receptorii săi cu proprietățile canalelor ionice, aproape fără a afecta afinitatea. pentru receptorii de glicoproteine ​​(Tabelul 3, 22, 23).

Cercetările au arătat capacitatea substituenților în vrac introduși în molecula de adamantan de a modifica afinitatea serotoninei pentru receptorii săi. Există, de asemenea, dovezi confirmate experimental că introducerea unui radical extrem de lipofil în molecula derivată sporește interacțiunea acestuia cu regiunile hidrofobe ale moleculelor receptorului. Aceste date sunt confirmate în experimentul nostru: benzoatul de 4-adamantancarboxamido-etil (nr. 14) are într-adevăr o activitate similară (Tabelele 15, 22), ajutând la încetinirea semnalului de activare de către ADP și serotonină. Mai mult, se observă o oarecare blocare a transmisiei semnalului sub influența benzoatului de 4-adamantancarboxamido-etil după 10 minute. Nu are aproape niciun efect asupra agregării induse de adrenalină, iar motivul acestui fenomen rămâne de stabilit.

Derivații de aminoacizi ai adamantanului - 3-(1-adamantancarboxamido-etil)indol (Nr. 12) și N-(1-adamantoil)-D,L-histidină (Tabelul 1, Nr. 13) - au, de asemenea, activitate interesantă. N-(1-adamantoil)-D,L-histidina pare să antagonizeze doar canalele ionice ale serotoninei plachetare, iar 3-(1-adamantancarboxamido-etil)indol este foarte eficient în accelerarea agregării plachetare indusă atât de serotonină, cât și de ADP și adrenalină. Tabelele 13, 22, 23), adică activitatea sa este direcționată către receptorii de tip glicoproteină. Substanța nr. 12 este, de asemenea, interesantă deoarece structura sa este foarte asemănătoare cu structura serotoninei în sine (Fig. 7). În ciuda faptului că substanța nr. 12, ca și serotonina, este un derivat al triptofanului, nu este agonistul acesteia (Tabelul 21).

Concluzie

Efectul derivaților de adamantan asupra capacității trombocitelor umane de a se agrega este una dintre numeroasele manifestări ale activității lor biologice. Lipofilitatea ridicată și natura membranotropă a adamantanului, precum și posibilitatea introducerii diverșilor substituenți în structura sa, fac posibilă sintetizarea compușilor cu o activitate biologică dată. Dar, la fel ca toate substanțele foarte active, derivații de adamantan sunt toxici, deoarece chiar și compușii cu un mecanism de acțiune biochimic bine studiat pot provoca reacții adverse în organism. Deoarece medicamentele pe bază de derivați de adamantan sunt introduse din ce în ce mai mult în practica farmacologică, devine necesar un studiu detaliat al proprietăților lor biochimice. Rezultatele cercetării prezentate în această lucrare pot fi primii pași către crearea unor medicamente extrem de eficiente care să rezolve problemele multor persoane care suferă de patologii ale sistemului hemostatic.

Cel mai probabil, activitatea biologică a derivaților de adamantan în raport cu receptorii serotoninei - canalele ionice - se datorează capacității de a-și modifica conformația datorită modificărilor în structura membranei plasmatice. Acest lucru este cu atât mai probabil dacă luăm în considerare natura membranotropă a miezului adamantan și structura canalului receptorilor serotoninei. Deoarece alți receptori ai serotoninei, cum ar fi receptorii pentru ADP și adrenalină, sunt glicoproteine, iar structura lor este mai complexă și mai puțin dependentă de orientarea straturilor fosfolipide ale membranei, există un mecanism mai probabil pentru modularea funcționării receptorului în sine. , în urma căreia activarea proteinelor G are loc mai eficient.

Studiile efectuate au permis tragerea de noi concluzii cu privire la dependența influenței derivaților de adamantan asupra agregării trombocitelor umane de structura chimică a substituenților adamantilului. Au fost clarificate unele aspecte legate de mecanismele de acțiune a compușilor nou sintetizați asupra receptorilor plachetari umani: capacitatea lor de a modifica afinitatea liganzilor nu numai pentru receptori - canale ionice, ci și pentru receptorii cuplati cu proteina G este evidentă, ceea ce determină direcția cercetărilor ulterioare.

concluzii

1. Efectul derivaților de adamantan asupra agregării trombocitelor umane indusă de serotonină este determinat de structura lor și de aranjarea relativă a atomilor din moleculă.

2. Derivații de adamantan au efecte diferite asupra agregării plachetare umane inductibile, ceea ce este o consecință a capacității lor de a influența funcționarea diverșilor receptori plachetari, dar niciunul dintre compușii studiați nu este capabil să inducă în mod independent agregarea trombocitară (nu au proprietăți agoniste) .

3. Efectul de amplificare al iodurii de 2--1-metilpiridiniu este cel mai pronunțat în agregarea trombocitară indusă de serotonină, ceea ce se datorează capacității sale de a spori afinitatea serotoninei pentru receptorii săi cu proprietățile canalelor ionice, aproape fără a afecta afinitatea. pentru receptorii de glicoproteină (sinergistul serotoninei).

4.N-(1-adamantilacetil)-4-aminopiridina și 3-(1-adamantancarboxamido-etil)indol îmbunătățesc agregarea plachetară, indusă de serotonină, adrenalină și ADP, crescând eficiența uneia dintre etapele funcționării glicoproteinei receptori, comuni tuturor tipurilor acestor receptori.

5.N-(1-adamantoil)-D,L-histidina, dimpotrivă, încetinește în mod eficient agregarea plachetară indusă de serotonină prin blocarea semnalului de activare de către serotonină (antagonistul serotoninei).

Benzoatul de 6,4-adamantancarboxamido-etil ajută la încetinirea agregării trombocitelor induse atât de ADP, cât și de serotonină, fără a afecta agregarea indusă de adrenalină.

Literatură

1. Andronova V. L. Activitatea antivirală a medicamentelor din seria adamantanului. //Antibiotice și chimioterapie. - 1996. - 41, Nr. 718. - P. 26-30.

2.Antonikov I.M. Forma trombocitelor de șobolan în diferite etape ale procesului de agregare a acestora. // Vestn. Academician Miere. Sci. -1981. - 55, nr 6. P. 78-79.

3.Bagriy E.I Adamantans: preparare, proprietăți, aplicare. - M.: Nauka, 1989. - 264 p.

4. Baluda V. P., Barkagan Z. S., Goldberg E. D. et al. Metode de laborator pentru studierea sistemului hemostazei. - Tomsk, 1980. - 84 p.

5. Baluda V. P., Lukoyanova T. I. Sistemul generator de prostacicline al peretelui vascular și trombogeneza. // Prima Conferință All-Union, Afectarea peretelui vascular și hemostază. (Poltava, 1981). - P. 20.

6. Belushkina N. N., Severina I. S. Inhibarea agregării trombocitelor induse de ADP de către guanidinotioli, o nouă clasă de activatori ai guanilat-ciclazei și substraturi NO sintetazei. // Biochimie. - 1996. - 61, Nr. 12. - P. 2140-2146.

7. Votyakov V. I., Boreko E. I., Vladyko G. V., Karako N. I., Korobchenko L. V. Căutați compuși activi împotriva virusurilor gripale și agenților patogeni ai altor infecții virale respiratorii acute. // Chimioterapia și chimioprofilaxia gripei și infecțiilor respiratorii acute. (Lucrări științifice colectate). - L., 1990. - P. 150.

8. Vorobyov V. B. Fiziologia hemostazei. - Rostov-pe-Don: Editura. casa prof Presă, 2004. - 192 p.

9. Vrynceanu N. A. Toxicitatea acută a noilor derivați adamantan și norbornan. // Toxicologia medicamentelor. – Kiev: Institutul de Farmacologie și Toxicologie al Academiei de Științe Medicale din Ucraina, 2001. – P. 20-25.

10. Golubeva M. G. Rolul receptorilor adrenergici în reglarea sistemului de coagulare a sângelui. // Fiziologia umană. - 1989. - 15, Nr. 6. P. 127-137.

11. Danilenko G. I., Mokhort M. A., Trius F. P. Sinteza și activitatea biologică a derivaților adamantanului. acizi N-(adamantoil-1)antranilici. // Chim.-ferme. Jurnal - 1973. - 17, nr. 10. pp. 15-17.

12. Danilenko G. I., Ribalko S. L., Maksimov M. și colab. Căutați inhibitori VIL și herpes printre compuși cadru similari și acizi piridincarboxilici // Biopolimeri și celule. - 1999. - 15, Nr. 3 – P. 207-212.

13. Ermokhin V. A. Sinteza și activitatea biologică a derivaților de adamanil ai aminelor aromatice heterofuncționale și heterociclurilor care conțin azot: rezumatul autorului. dis. ...cad. chimic Sci. – Samara, 2007. - 22 p.

14. Ermokhin V. A., Zarubin Yu P., Purygin P. P., Zolotarev P. N. Sinteza și activitatea antibacteriană a N-(nitrofenil)-adamantil-1-carboxamidelor și a iodurilor de N-metilpiridiniu care conțin adamantan. // Buletinul SamSU. Seria științe naturale. – 2007. – 56, Nr. 6. – P. 378-384.

15. Ermokhin V. A., Purygin P. P., Zarubin Yu P. Derivați ai esterilor și amidelor adamantanelor acidului 4-aminobenzoic. // Buletinul SamSU. Seria științe naturale. – 2006. – 49, Nr. 9. – P. 92-96.

16. Ermokhin V. A., Purygin P. P., Klenova N. A. Sinteza și activitatea hemolitică a aminelor și anilinelor heterociclice N-adamantoil-substituite. // Buletinul SamSU. Seria științe naturale. – 2004. – 34, Nr. 4. – P. 138-144.

17. Zinchenko V. P., Dolgacheva L. P. Semnalizarea intracelulară. – Pushchino: Editura electronică „Microscopie analitică”, 2003. – 84 p.

18. Indulen M.K., Kolnina V.A., Ryazantseva G.M., Bubovich V.I. Mecanisme de acțiune antivirală a derivaților adamantanului. Ed. M.K. Indulen. - Riga: Cunoașterea, 1981. – 168 p.

19. Isaev S. D., Novikova M. I., Korobenko L. V. Sinteza și activitatea biologică a oxazolilor și imidozolilor care conțin adamantil. // Substanțe fiziologic active: colecția interdepartamentală republicană. – 1991. – 125, Nr. 23. – P. 26-31.

20. Kasyan L.I., Kasyan A.O., Golodaeva E.A. // Jurnal de chimie organică. – 2000. – 36, Nr. 12. - P. 1776-1779.

21. Kovalev I. E., Shchipulina N. V. // Rapoarte ale Academiei Ruse de Științe. - 2001. - 378, Nr. 6. - P. 819-822.

22. Kozinets G. I., Sarycheva T. G. și colab. Atlas de celule sanguine și măduvă osoasă. Ed. G. I. Kozinets. – M.: „Triada-X”, 1998. - 160 p.

23. Kolosova E. A., Kurbatova S. V., Solovova N. V., Finkelshtein E. E., Yashkin S. N. Topologia moleculelor poliedrice folosind exemplul derivaților de adamantan. // Buletinul SamSU. Seria științe naturale. – 2001. – 20, Nr. 2. – P. 178-188.

24. Krasutsky P. A., Semenov I. P., Novikova M. N., Veselova T. V. Aminoacizi din seria adamantanului. Sinteza și activitatea antivirală a α-aminoacizilor din seria adamantanului și a derivaților acestora. // Farma-chimie. Revistă. - 1985. - 57, Nr. 7. - P. 17-25.

25. Kubar O. I. Analiza reacțiilor adverse cauzate de medicamentele antivirale // Drug Safety. – 1997. – 78, Nr. 1. - P. 5-7.

26. Kulberg A. Ya. Biochimia membranelor. Ed. A. A. Boldyreva. Carte 4. – M.: Mai sus. şcoală, 1987. – 103 p.

27. Kurbatova S. V., Shumskaya N. Yu Studiul relației dintre structura și comportamentul cromatografic al derivaților de carbonil adamantan în condiții HPLC în fază inversă. // Buletinul SamSU. Seria științe naturale. - 2004. –34, Nr. 6. – P. 158-168.

28. Litvinov V.P. Activitatea biologică a derivaților adamantanului. // Chimia compuşilor heterociclici. - 2002. - 50, Nr. 1. - P. 12-39.

29. Murray R., Grenner D., Mayes P., Rodwell V. Human biochemistry: in 2 volumes. T. 2. Per. din engleză: - M.: Mir, 1993. – 415 p.

30. Morozov I. S., Petrov V. I., Sergeeva S. A. Farmacologia adamantanilor. - Volgograd: miere de Volgograd. Academia, 2001. - 320 p.

31. Nozdrachev A.D., Bazhenov Yu.I., Barannikova I.A., Batuev A.S. Bazele fiziologiei: manual pentru universități. Ed. Academician A. D. Nozdracheva. - Sankt Petersburg: „Lan”, 2001. – 1088 p.

32. Panchenko E. P., Dobrovolsky A. B. Tromboza în cardiologie. Mecanisme de dezvoltare și posibilități de terapie. – M.: Sport și cultură, 1999. – 464 p.

33. Parkhomenko A. N. Fiziopatologia trombozei acute în arterele coronare ale inimii: idei despre patogeneza sindromului coronarian acut. – Kiev: Inst. Cardiologie numită după N. D. Strazhesko AMS al Ucrainei, 2004. – 25 p.

34. Pokrovsky V. M., Korotko G. F., Natochin Yu și colab. Manual in 2 volume. Ed. V. M. Pokrovsky, G. F. Korotko. – M.: Medicină, 1997. – 368 p.

35. Rusyaev V. A., Votyakov V. I., Fedorov A. N. Evaluarea comparativă a efectului farmacoterapeutic al compusului D-84 și al rimantadinei în infecția experimentală gripală a șoarecilor albi // Activitatea antivirală și mecanismul de acțiune al diferiților compuși chimici (ed. R. . A. Kukain). - Riga: Zinatne, 1979. - p. 49-53.

36. Samal A. B., Cherenkevich S. I., Khmara N. F. Agregarea trombocitară: metode de studiu și mecanisme. – M.: Universitetskoe, 1990. - 104 p.

37. Sevastyanova V.V., Krayushkin M.M., Yurchenko A.G. Progrese în chimia adamantană. // Progrese în chimie. – 1970. – 39, Nr. 10. – P. 1721-1754.

38. Sergeev P. V., Seifulla R. D., Maisky A. I. Mecanismele fizico-chimice și reglarea hormonală a coagulării sângelui. – M: Mai sus. scoala, 1974. - 145 p.

39. Stolyarov Z. E., Lyashchenko K. P. Derivați amino ai adamantanului și răspunsul imun // Chem-pharm. revistă. – 1995. – 8, Nr. 3. – P. 9-10.

40. Trifonov E. V. Psihofiziologia umană. – M.: Mai sus. şcoală, 2004. – 130 p.

41. Frolov Yu P. Metode matematice în biologie. Calculatoare și programare. - Samara: „Universitatea Samara”, 1997. - 265 p.

42. Zimmerman M., Jenig W., Wutke W. şi colab. În 3 volume. T. 2. Per. din engleza Ed. R. Schmidt și G. Tevs. – M.: Mir, 1996. – 313 p.

43. Chirkov Yu Yu., Belushkina N. N., Tyshchuk I. A., Severina I. S. Modificări ale activității guanilat-ciclazei umane în timpul agregării induse de ADP. // Buletinul experimental biol. si medicina. – 1991. – 52, Nr. 2. – P. 152-154.

44. Bojarski A. J., Mokrosz M. J. et al. Influența substituției la partea aromatică a 1,2,3,4-tetrahidroizochinolinei asupra activităților receptorilor 5-HT1A/5-HT2A in vitro și in vivo ale derivaților săi 1-adamantoiloaminoalchil. // J. Bioorganic și Med. Chim. – 2002. – 10, N 5. R. 87-95.

45. Bonaventure P., Nepomuceno D., Miller K., Chen J., Kuei C., Kamme F. și alții. Caracterizarea moleculară și farmacologică a subtipurilor de receptori 5-HT 2A și 5-HT 2B de seretonină la câini. // Jurnalul European de Farmacologie. - 2005. - 513, N 3. R. 181-192.

46. ​​​​Cerrito E., Lazzaro M. P., Gaudio E., Arminio P. și Aloisi G. Receptorii 5HT 2 și eliberarea serotoninei: rolul lor în agregarea trombocitelor umane. // Științele vieții. - 1993. -53, N 3. R. 209-215.

47. Clerck F., Xhonneux B., Wiele r. Mecanisme biochimice în agregarea plachetară umană indusă de 5-hidroxitriptamină // Agents Actions - 1985. - 17, N 2. R. 220-228.

48. Cohen M. L., Robertson D. W., Bloomquist W. E. și Wilson H. C. LY215840, un antagonist puternic al receptorului de 5-hidroxitriptamină (5-HT) 2, blochează receptorii vasculari și trombocitari 5-HT 2 și întârzie ocluzia într-un model de iepure de tromboză. // J. Pharmacol. Exp. Acolo. - 1992.- 261, N 5. R. 202-208.

49. Crawford N., Castle A. Microtudule and contractile submitting proteins of blood platelets. Rolul în activitățile hemostatice. // Microtubuli și inhibitori de microtubuli. – 1975. – 305, N 6. R. 229-246.

50. Dahl M., Puusten T., Uotila P. Efectul acidului arahidonic asupra agregabilității plasmei bogate în trombocite umane. // Prostaglandine leicotriens Med. – 1982. – 8, N 2. R. 133-139.

51. F. F. De Clerk și A. G. Herman. 5-hidroxiriptamina și agregarea trombocitelor. //Hrănit. Proc . – 1983. –42, N 3. R. 228-232.

52. Fred De Clerck, Benoit Xhonneux, Josée Leysen și Paul A. J. Janssen. Implicarea situsurilor receptorilor 5-HT2 în activarea trombocitelor de pisică. // Cercetarea trombozei. – 1984. – 33, N 1. R.305-321.

53. Frojmovic M. M., Milton J. C. Mărimea trombocitelor umane, forma și funcțiile conexe în sănătate și boală. // Fizol. Rev. – 1982. – 62, N 2. R. 185-201.

54. Frojmovic M. M., Milton J. C. Fizic. Modificări chimice și funcționale în urma activării trombocitelor în trombocite normale și „gigant”. // Celule de sânge. - 1983. - 9, N 5. R. 359-382.

55. Fujio M., Kuroita T. et. al. N-1-adamantancarboxamide ca noi antagonişti ai receptorilor 5-HT2. // Bioorganic și Med. Chim. Lett. – 2000. – 4, N 10. R. 2457-2461.

56. Fujio M., Togo Y., Tomozane H., Kuroita T., Morio Y., Katayama J. şi Matsumoto Y. N-(metil)ciclohexan-carboxamide ca agonişti selectivi ai receptorului 5-HT1A. // Chimie bioorganică și medicinală Lett. – 2000. - 10, N 6. R. 509-512.

57. Gear A., ​​​​R. L. Reacții de preagregare a trombocitelor. // Sânge. – 1981. – 58, N 3. R. 477-490.

58. Hoyer D., Clarke D.E. și Fozard J.R. et al . Clasificarea Uniunii Internaționale de Farmacologie a receptorilor pentru 5-hidroxitriptamina (Serotonina). // Pharmacol Rev. – 1994. – 10, N 46.R. 157.

59. Jacobs K. H. Determinarea reacției de oprire pentru adenilat-ciclaza trombocitară umană inhibată de epinefrină. //EURO. J. Biochim. – 1983. – 132, Nr. 1. R. 125-130.

60. Komiotis D., Pananookooln S. J., Zaw K., Dieter J. P., G. C. Le Breton și D. L. Venton. Sinteza analogilor acidului dl-cis- și (4R,5R)-trans-7--5(Z)-heptenoic ca antagonist al receptorului tromboxan tromboxan A2. // Jurnalul European de Chimie Medicinală. – 1995. – 30, N 4. R. 321-326.

61. Kroll M. H., Schafer A. I. Mecanismele biochimice de activare a trombocitelor. // Sânge. – 1989. – 74, N 9. R. 1181-1195.

62. Li Hui Yang, Demetra Callas, Jean Marc Herbert și Jawed Fareed. Modularea funcției trombocitelor și a acțiunilor contractile ale mușchilor netezi vasculari de către un nou antagonist 5-HT2 selectiv, foarte puternic (SR46349). //
Cercetarea trombozei. - 81, N 5. P. 555-567.

63. Li N., Wallen N.H., Ladjevardi M. și Hjemdahl P. Effects of serotonin on platelet activation in whole blood. // Coagul de sânge. Fibrinoliza. – 1997. -8, N 27. R. 517-523.

64. Mahaut-Smith M. P.; Ennion S. J.; Rolf M. G.; Evans R. J. ADP nu este un agonist la receptorii P2X(1): dovezi pentru receptori separați stimulați de ATP și ADP pe trombocitele umane. // Br. J. Pharmacol. – 2000. – 131, N 1. R. 10-14.

65. Marlar R. A., Kleiss A. J., Griffin J. H. O cale extrinsecă alternativă a coagulării sângelui uman. // Sânge. – 1982. – 15, N 60. R. 13-53.

66. Maurer-Spurej E., Pittendreigh C. și Solomons K. Influența inhibitorilor selectivi ai recaptării serotoninei asupra serotoninei trombocitelor umane. // Tromb. Haemost. – 2004. – 12, N 91. R. 119-128.

67. Nagatomo T., Rashid M., Abul Muntasir H. și Komiyama T. Functions of 5-HT 2A receptor and its antagonists in the cardiovascular system. // Farmacologie și Terapeutică. – 2004. – 104, N 1. R. 59-81.

68. Niewiarowski S. Reacția de eliberare a trombocitelor și proteinele trombocitelor secretate. // Hemostază și tromboză. – 1981. – 11, N 18. R. 73-83.

69. Ogawa T., Sugidachi A., Tanaka N., Fujimoto K. și Asai F. Profilele farmacologice ale R-96544, forma activă a unui nou antagonist al receptorului 5-HT2A R-102444. // Jurnalul European de Farmacologie. – 2002. – 457, N 20. P. 107-114.

70. P. Anne McBride, J. John Mann, Margaret J. Polley, Amy J. Wiley și John A. Sweeney. Evaluarea indicilor de legare și a răspunsului fiziologic al receptorului 5-HT2 pe trombocitele umane. //
Științele vieții. - 1987. - 40, N 4. R. 1799-1809.

71. Pauwels P. J. Receptorii 5-HT și liganzii lor. //Tocris. Rev. – 2003. – 27, N 25. R. 1-7.

72. Perri T., Pasini F. L., Frigerio C. et al. Farmacodinamica ticlopidinei la om în raport cu concentrația plasmatică și a celulelor sanguine. // Europ. J. Clin. Farmacologie. – 1991. – 41, N 20. R. 429-434.

73. Rao G. H. R., White J. C. Potențarea adrenalinei a arahidonatului-induce agregarea trombocitelor cu deficit de ciclooxigenază. // J. Biol. Chim. – 1980. – 255, N 8. R. 355-366.

74. Rivail L. et al. Dinamica moleculară la scară largă a unui receptor cuplat cu proteina G, receptorul serotoninei uman 5-HT4, într-un strat dublu lipidic. // Journal of Molecular Structure, Theochem. – 2007. – 31, N 48. P. 1-8.

75. Rudnick G., Fishkes H., Nelson P. J., Schuldiner S. Evidence for two different serotonin transport systems in platelets. // J. Biol. Chim. – 1980. – 17, N 2. R. 3638-3641.

76. Rupprecht H.-J. Antagonişti ai receptorilor de adenozin difosfat: de la farmacologie la practica clinică. // Europ. Heart J. – 2000. – 2, N 7. R. 1-5.

77. Savi P., Herbert J.-M. Receptorii ADP pe trombocite și agenți antiagreganți selectivi pentru ADP. // Recenzii de cercetare medicală. – 1996. – 16, N 2. R. 159-179.

78. Savi P., Heilmann E., Nurden P. et al. Clopidogrel: un medicament antitrombotic care acționează asupra căii de activare dependentă de ADP a trombocitelor umane. // Clin. Appl. Tromboză. Hemostaza. – 1996. – 2, N 3. R. 35-42.

79. Smith S. K., Limbird L. E. Solibilizarea receptorilor α-adrenogetici plachetari umani: dovezi că ocuparea agonistului receptorului stabilizează interacțiunile receptor-efector. //Proc. Nat. Acad. Sci. STATELE UNITE ALE AMERICII. 1981. – 78, N7. R. 4026-4030.

80. Stanford S. C. 5-hidroxitriptamina. // Neurotransmițători, medicamente și funcție cerebrală. – 2001. – 57, N 45. R. 187-209.

81. Thebault J. J., Kieffer G., Cariou R. Farmacodinamica în doză unică de clopidogrel. // Semin Tromb Hemost. – 1999. – 25, N 2. R. 3-8.

82. Thomas D. R. și colab. SB-699551-A (diclorhidrat de 3-ciclopentil-N-N-[(40-([(2-feniletil)amino]metil)-4-bifenilil)metil]propanamidă), un nou antagonist selectiv al receptorului 5-ht5A , îmbunătățește funcția neuronală 5-HT: dovezi pentru un rol de autoreceptor pentru receptorul 5-HT5A în creierul de cobai. // Neurofarmacologie. – 2006. – 51, N 5. R. 566-577.

83. Vickers S. P., Easton N., Malcolm C. S., Allen N. H., Porter R. H., Bickerdike M. J. și Kennett G. A. Modularea comportamentului de contracție a capului mediat de receptorul 5-HT2A la șobolan de către agoniştii receptorului 5-HT2C. // Farmacologie Biochimie și Comportament. – 2001. – 69, N 8. R. 643-652.

84. Walcourt-Ambakederemo A. și Winlow W. Receptorii 5-HT pe neuronii Lymnaea identificați în cultură: Caracterizarea farmacologică a receptorilor 5-HT 2. // Farmacologie generală: sistemul vascular. – 1994. – 25, N 6. R. 1079-1092.

85. White J. G. Calea secretorie a trombocitelor bovine. // Sânge. - 1987. – 69, N 3. R. 878-885.

86. White J. G., Clawson C. C., Gerrarg J. M. Platelet ultrastuctura. // Homeostazie și tromboză. Edinburgh e. A. – 1981. – 65, N 28. R. 22-49.

87. Mössner R. și Lesch K. P. Rolul serotoninei în sistemul imunitar și în interacțiunile neuroimune. // Comportamentul creierului Imun. – 1998. – 75, N 12.R. 249.

APLICARE

Tabelul 1.

Date despre spectre IR și 1H RMN pentru iodurile de N-adamantoil-1-metilpiridiniu și O-adamantoil-N-metilpiridiniu

conexiuni	Spectrul IR, n, cm -1			J, Hz
	CH 2	CO–NHR	Restul	HAD,HCH2	H Ar(Het), H NH
1	2846, 2912		1223, 1176, 1072	1,66 s (12H, CH2), 1,94 s (3H, CH2), 4,25 s (3H, CH3)	8,06 t (1H5, Het), J = 4 8,49 d (1 H6, Het), J = 2,7 8,67 d (1 H4, Het), J = 2 9,43 s (1H2, Het),
2		3300			8.00k (2 ore, Het) 8,42 s (1 H, Het)
3				1,67 s (12H, CH2), 1,95 s (3H, CH2), 2,19 s (2H, CH2), 4,36 s (3H, CH3)	8,04 t (1H5, Het), J =4 8,41 d (1H6, Het), J =2,2 8,67 d (1H4, Het), J =1,4 9,38 s (1H2, Het), 10,89 s (1H, NH)
			1620,1590, 1520,1395,	1,67 s (6H, CH2), 1,78 s (6H, CH2), 1,96 s (3H, CH), 3,61 s (3H, CH3)	7,16t (1H5, Het), 7,30 d (1H6, Het), 8,36 m (2H 3,4, Het)
		1755		1,14 m (3H, CH3), 1,24 t (2H, CH2), 1,67 s (3H, CH3), 1,74 m (12H, CH2), 2,02 m (3H, CH), 2,45 s (3H, CH3)	8,14d (1H5, Het), 8,34d (1H4, Het)

Masa 2.

Date din spectrele IR și 1H RMN pentru derivații de hidroxi și aminopiridine care conțin adamantil

conexiuni	Spectrul IR, n, cm -1			Spectru 1H RMN, d (ppm, de la TMS); J, Hz
	CH 2	CO-NHR		H Ad, H CH2	H Ar(Het), H NH
		3310	1630	1,70 s (6H, CH2), 1,92 s (6H, CH2),	7,95d (1H, Het), 8,05 d (1H, Het), 8,42 s (1H, Het),
		1740 ν(C=O), 1590 ν(C=C) Ar, 1215 ν(C–O–C)		1,67 s (6H, CH2), 1,80 s (6H, CH2), 1,96 s (3H, CH)	6,18 t (1H5, Het), 6,31d (1H6, Het), 7,36 m (2H 3,4, Het)
8	2846, 2900	3255	1685	1,63 s (12H, CH2), 1,92 s (3H, CH2), 2,15 s (2H, CH2)	7,06 t (1H4, Het, J = 3, 7,74 t (1H5, Het), J =4, 8,09 d (1H6, Het), J =4, 8,28 d (1H3, Het), J =4, 10,20 s (1H, NH)
	2850, 2900	3440, 3230	1676	1,62 s (12H, CH2), 1,92 s (3H, CH2), 2,09 s (2H, CH2)	7,57 s (1H 2,6, Het), 8,38 s (1H 3,5, Het), 10,09 s (1H, NH)
10		3370		1,63 s (12H, CH2), 1,94 s (3H, CH2), 2,10 s (2H, CH2)	7,42 d (1H6, Het), J =1,4, 8,07 t (1H5, Het), J =4, 8,24 d (1H4, Het), J =5, 8,78 s (1H2, Het), 10,12 s (1H, NH)

Tabelul 3.

Date din spectrele IR și 1H RMN pentru N-adamantoil-α-aminoacizi

conexiuni	Spectrul IR, n, cm -1		Spectru 1H RMN, d (ppm, de la TMS); J, Hz
	(C–H) Ad	n(N–H), n(C=O)	H Ad, H CH2	H Ar(Het), H NH
	2908, 2850	3394, 3317, 1720, 1693, 1654	1,65 m (6H, CH2), 1,76 m (6H, CH2), 2,80s (1H, CH), 4,15 m (2H, CH 2)	6,96 m (1H, Het), 7,04 m (1H, Het), 7,10 s (1H, Het), 7,27 m (1H, Het), 7,45 m (1H, Het), 7,53 m (1H, NH), 8,40 s (1H, NH, Het)
	2908, 2850	3413, 3217, 1693, 1640	1,65 m (6H, CH2), 1,76 m (6H, CH2), 1,94 s (3H, CH), 2,79 t (7,78 Hz, 2H, CH2) 3,30 k (14,6 Hz 2H, CH 2)	6,96 t (7,0 Hz, 1H, Het), 7,04 t (7,0 Hz, 1H, Het), 7,10 d (4 Hz, 1H, Het), 7,33 d (8 Hz, 1H, Het), 7,41 t (6 Hz, 1H, Het), 7,53 d (8 Hz, 1H, NH), 8,88 s (1H, NH Het)
	2904, 2847	3413, 1700, 1640	1,64 m (6H, CH2), 1,76 d (6H, CH2), 1,92 s (3H, CH), 2,92 m (2H, CH2), 3,99 k (11,24 8 Hz, 1H, CH)	6,59 s (1H, net), 6,96 d (6 Hz, 1H, Het), 7,41 d (4 Hz, 1 H, NH), 8,43 s (1H, NH Net)

Tabelul 4.

Date din spectrele IR și 1H RMN pentru derivații de acid 4-aminobenzoic care conțin adamantil

Conexiunea nr.	Spectrul IR, n, cm -1		Spectru 1H RMN, d (ppm, de la TMS); J, Hz
	n(N-H), n(C=O), altele	v(C-H)Ad
	3310, 1740, 1680, 1635, 1550, 1280, 850	2912, 2800	1,70 s (6H, CH2); 1,91 s (6H, CH2); 2,01 s (3H, CH); 1,30 t (3H, CH3), J= 7 Hz; 4,27 d (2H, CH2), J= 8 Hz; 7,84 d (2H, Ar), J= 8 Hz; 7,87 d (2H, Ar), J= 8 Hz;
	3410, 3198, 1728, 1670, 1450, 1404, 1272,1126	2904, 2851	1,30 m (6H, CH3), 1,70–2,01 m (15H, Ad), 2,48 s (4H, CH2), 3,27 s (2H, CH2), 7,84 d (2H, Ar) J=8 Hz, 7,87 d (2H, Ar) J= 8 Hz, 9,36 s (1H, NH)
	339–-3213 ush, 1693, 1605, 1542, 1508, 1450, 1411, 1284	2912, 2851	1,27 m (6H, CH3), 1,76–2,01 m (15H, Ad), 2,47 m (4H, CH2), 3,47 m (2H, CH2), 7,21 m (2H, Ar), 7,65 m (2H, Ar), 7,84 s (1H, NH), 9,4 s (1H, NH)
	3350–3317 ush, 1693, 1605, 1450, 1411, 1284, 1253	2912, 2854	1,24 s (6H, CH3), 1,70–2,08 m (15H, Ad), 2,50 m (4H, CH2), 3,3 m (2H, CH2), 3,80 s (3H, CH3), 7,16 s (H, Ar), 7,25 s (H, Ar), 7,59 d (1 H, NH), J=2 Hz, 9,68 s (1H, NH)